我最近要做肌肉组织切片的ATP酶染色,可是总是染成全黑或是全是无色,请问是什么原因造成的,具体的解决办法,或是谁有具体的染色步骤不吝赐教
热心网友
你所描述的问题很可能是溶液的pH值的问题，染色的结果与pH密切相关，附区分骨骼肌纤维类型的ATP酶组织化学方法： 显示肌球蛋白的ATP，肌纤维I、II型。 1。 组织固定于10%～15%中性福尔马林。 2。 水洗后入0。88庶糖水溶液，或1%阿拉伯胶（100ml加30g庶糖）浸2～3d。 3。 冰冻切片10um，分别放入三种不同PH值的预孵育液内，室温下10min。PH分别为10。4、4。65和4。3（准确）。 4。 入巴比妥钠液（PH9。4）1min。 5。 入孵育液30min，37℃。 6。 2%氯化钴（用前配制）3min 7。 蒸馏水洗3次1min/次 8。 1%硫化胺（用时配制）10min 9。 流水冲洗不少于10min。 10。 各级酒精脱水、透明、封片。 预孵育液： 1。 巴比妥钠PH10。4，取巴比妥钠4。12g，氯化钠1。998g，加蒸馏水1000ml。 2。 醋酸缓冲液PH4。65，A液：醋酸钠13。5g加蒸馏水至500ml。B液：冰醋酸6ml蒸馏水至500ml。取A液24ml，B液26ml混合至PH4。65。 3。 醋酸缓冲液PH4。3。用2液调PH至4。3。 孵育液： 取巴比妥钠液（PH9。4）10ml加三磷酸腺甘钠盐20mg。 结果： PH值 纤 维 类 型 I IIA IIB IIC 10。4 灰或白 黑 黑 黑 4。65 黑 白 灰或黑 黑 4。3 黑 白 白或灰 深灰-----------------------------------------------巴比妥钠能影响Ca2+-ATPase活性，对实验最后一步硫化胺沉淀显色很重要。另外，蔗糖溶液是为了保持更好的渗透压，让细胞原始形状保持更好，PBS应该不如蔗糖好。